אמצעי זהירות לאלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד

· פוליאקרילאמידג'ל חייב על ידי מונומר אקרילאמיד, חומר מוצא פילמור, זרז, והימין של מלח ותערובת חיץ יחד.

· אקרילאמידו-BIS (N, N '- מתילן כפול אקרילאמיד) הוא מטריצת הג'ל בצורת מונומר.

· אמוניום פרסולפט להתחיל תהליך פילמור דבק. הניסוח של הדבק דורש תמיסה של 10% אמוניום פרסולפט שהוכנה במים. רוב המידע הצביע על צורך בשימוש אקטיבי. עם זאת, ניתן להניח את התמיסה של 10% בטמפרטורה של 4℃ למשך מספר שבועות ללא אובדן משמעותי של פעילות. יש להשלים עד 10 מ"ל ולהשליך כאשר הדבק לא מצליח להצטבר.

טיפ: האחוז שלאקרילאמידברצף דבק ודבק חלבון אינו זהה. אם משתמשים באקרילאמיד מוכנה מראש: תמיסת BIS, הקפידו לקבל את הבקבוק הנכון.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) הוא זרז, בבקבוק חום, המונח במקרר. מוסיפים רגע לפני יציקת דבק.

· אלקטרופורזה של פוליאקרילאמיד בשימוש בזכוכית באלקטרופורזה יש לשטוף לפני ואחרי כל פעם. לאחר אלקטרופורזה יש לשטוף עם מברשת רכה ומטלית במי סבון חמים, לשטוף במים מזוקקים ולעמוד לייבוש.

· לחות ואבק עלולים לגרום עם פולימר חלול. לפני אלקטרופורזה, נקה את לוח הזכוכית בעזרת מנקה זכוכית ונגב אותה במברשת רכה. יש לשטוף במים מזוקקים ולייבש היטב במגבון נייר. שטיפה עם 70% אתנול לפני ניגוב בנייר עוזרת לנקות ולהאיץ את הייבוש. הוסף דגימות של אקרילאמיד ברצף: BIS, מים, תמיסת חיץ, אמוניום פרסולפט, TEMED. מנערים היטב ומוזגים מיד.

אין צורך לשחרר פולי אקרילאמיד לפני פילמור. (אקרילאמיד היה מונח בוואקום כדי להסיר בועות מכיוון שחמצן מעכב פילמור.)

טיפים לדוגמא לנקודת דבק אופקית.

· שים פיסת נייר שחור בקופסה התחתונה, רקע שחור כדי ליצור חור לדוגמה כדי לראות יותר בבירור.
· חיץ מלא מיכל דבק, רק מעל הקולואיד.
· אם בקצה יש אור, הדליקו את האורות, תנו לאור לזרוח קולואידי. צייר את המדגם לתוך הפיפטה.
· שימוש במכשיר פיפטציה אוטומטי.
· ב-10-200 mu ניתן להשתמש בנקודת תנועה נוזלית 1 ברוב הנקודות בדגימה. עבור חורי דגימה קטנים מאוד (פחות מ-10μ1), ראש הפיפטה הארוך המשמש לדבק רצף נוח יותר.

· פיפטציה רק ​​שקועה בדגימה, שואפת נוזל שנע באיטיות. המדגם עשוי להיראות דביק עם גליצרין, ושאיבה מהירה עלולה למשוך בועות אוויר לתוך ראש הפיפטה.

· דגימות לאחר שאיפת ראש פיפטציה, יזיזו את ראש הנוזל בעדינות על קצה הצינור או ניגוב נייר מוצץ ראש נוזל מחוץ לטיפות. היזהר לא למצוץ את המדגם.

הנח את המדגם לתוך חור המדגם

· מכשיר פיפטציה כדי לשמור על לחץ קטן, לגרום לדגימות להזיז מעט את ראש הנוזל על גדותיו.
· ראש הפיפטציה המוכנס למאגר, מעט גבוה מהחורים הנקודתיים, שומר על לחץ חיובי. ניתן להחדיר את קצה הפיפטה לתוך חור קטן.
· לאט וביציבות הדגימות החוצה. קצה הפיפטה ממוקם מעל לחור המדגם הנקודתי, והדגימה תשקע לתוך החור. תן למדגם לשקוע כדי למלא את חור המדגם במקום לדחוף פנימה.
· לאחר הטיפה האחרונה של דגימה עם ראש נוזלי, הנוזל יעבור לרגל השנייה, לאט לאט יעלה את תנועת הנוזל, יצא מהמאגר

כיצד לבצע דגימת דבק אנכית?

· חורים לדוגמא של נקודת דבק אנכית שנוצרו בין שתי חתיכות זכוכית. בדבק דק מאוד, לא ניתן אפילו להחדיר את ראש הפיפטה בין שתי לוחות זכוכית. שימו לב לגליצרין! שים את ראש הפיפטה מעל חור המדגם והדגימה תשקע לתוך החור.
· מדגם נקודת לפני, הקפד לשים את הנקודה האנכית של חור מדגם פוליפרופילן acyl ג'ל נשטף נקי. שטפו את האקרילאמיד הלא-פולימר והמים שעלולים להופיע בתחתית חור המדגם. המים יכולים להפוך את חור המדגם לקטן משמעותית. השתמש במזרק של 25 מ"ל או 50 מ"ל ומחט בגודל 18. שפכו את חיץ האלקטרופורזה ושטפו בזהירות את חור המדגם.
· יכול להיות קשה לראות את חור המדגם, אך יחד עם זאת, השאר קל. אם יש חורים עודפים, ניתן לבדוק את חיץ המדגם עם ברומופנול כחול.