אמצעי זהירות לאלקטרופורזה בג'ל פוליאקרילאמיד

· פוליאקרילאמידג'ל חייב להיות מורכב ממונומר אקרילאמיד, חומר מוצא לפולימריזציה, זרז, ותערובת מלח וחוצץ.

· אקרילאמידו-BIS (N,N'- מתילן אקרילאמיד כפול) הוא מטריצת ג'ל בצורת מונומר.

· תהליך פילמור דבק התחלתי של אמוניום פרסולפט. ניסוח הדבק דורש תמיסת אמוניום פרסולפט 10% שהוכנה במים. רוב המידע הצביע על צורך בשימוש פעיל. עם זאת, ניתן להניח את תמיסת ה-10% בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך מספר שבועות ללא אובדן פעילות משמעותי. יש להכין עד 10 מ"ל ולזרוק כאשר הדבק אינו מתקבץ.

טיפ: האחוז שלאקרילאמידבדבק ריצוף ודבק חלבון אינם זהים. אם משתמשים בתמיסת אקרילאמיד: BIS מוכנה מראש, ודאו שאתם מקבלים את הבקבוק הנכון.

· TEMED (N, N, N', N'- טטרמתיל אתילן-דיאמין) הוא זרז, בבקבוק חום, המונח במקרר. יש להוסיף אותו רגע לפני שפיכת הדבק.

· יש לשטוף זכוכית אלקטרופורזה של פוליאקרילאמיד לפני ואחרי כל אלקטרופורזה. לאחר האלקטרופורזה, יש לשטוף בעזרת מברשת רכה ומטלית במים חמים וסבון, לשטוף במים מזוקקים ולהניח לייבוש.

· לחות ואבק עלולים לגרום לזיהומים עם פולימר חלול. לפני האלקטרופורזה, יש לנקות את לוח הזכוכית בעזרת חומר ניקוי זכוכית ולנגב אותו בעזרת מברשת רכה. יש לשטוף במים מזוקקים ולייבש היטב בעזרת מגבון נייר. שטיפה עם אתנול 70% לפני ניגוב בנייר מסייעת בניקוי ומזרזת את הייבוש. יש להוסיף דגימות של אקרילאמיד ברצף: BIS, מים, תמיסת בופר, אמוניום פרסולפט, TEMED. יש לנער היטב ולמזוג מיד.

אין צורך להסיר גזים מפוליאקרילאמיד לפני הפולימריזציה. (בעבר היו מכניסים אקרילאמיד לוואקום כדי להסיר בועות מכיוון שחמצן מעכב את הפולימריזציה.)

טיפים לדוגמה של נקודת דבק אופקית.

· שימו פיסת נייר שחורה בקופסה התחתונה, עם רקע שחור כדי ליצור חור לדוגמה כדי לראות בצורה ברורה יותר.
בופר מלא במיכל דבק, ממש מעל הקולואיד.
אם יש אור בקצה, הדליקו את האורות, תנו לאור לזהור קולואידי. שאבו את הדגימה לתוך פיפטה.
· שימוש במכשיר פיפטה אוטומטי.
· ניתן להשתמש בנקודת הזזת נוזל של 10-200 מיקרומטר ברוב הנקודות בדגימה. עבור חורי דגימה קטנים מאוד (פחות מ-10 מיקרומטר), ראש פיפטה ארוך המשמש לדבק ריצוף נוח יותר.

· פיפטה שקועה בדגימה, תוך שאיפה של נוזל הנע באיטיות. הדגימה עשויה להיראות דביקה עם גליצרין, ושאיבה מהירה עלולה למשוך בועות אוויר לתוך ראש הפיפטה.

· לאחר שאיבת הדגימות, ראש הפיפטה יזיז בעדינות את ראש הנוזל על קצה הצינור או שיטת נייר הגיבוי תשאב את ראש הנוזל מחוץ לטיפות. יש להיזהר לא למצוץ את הדגימה.

הכניסו את הדגימה לתוך חור הדגימה

· מכשיר פיפטה לשמירה על לחץ קטן, לגרום לדגימות לזוז מעט ולגלות את ראש הנוזל.
· ראש הפיפטה מוכנס לתוך הבופר, מעט גבוה יותר מחורי הנקודה, שומר על לחץ חיובי. ניתן להכניס את קצה הפיפטה לתוך חור קטן.
· לאט ובהתמדה להוציא את הדגימות. קצה הפיפטה ממוקם מעל חור הדגימה הנקודתי, והדגימה תשקע לתוך החור. תן לדגימה לשקוע כדי למלא את חור הדגימה במקום לדחוף אותה פנימה.
· ברגע שהטיפה האחרונה של הדגימה עם ראש הנוזל, הנוזל יעבור לרגל השנייה, יעלה באיטיות את הנוזל לזוז, ויוצא מהבופר

כיצד לבצע דגימת דבק אנכית?

· חורי דגימה אנכיים בנקודת דבק שנוצרו בין שתי חתיכות זכוכית. בדבק דק מאוד, ראש הפיפטה אפילו לא יכול להיות מוכנס בין שתי לוחות זכוכית. שימו לב לגליצרין! הניחו את ראש הפיפטה מעל חור הדגימה והדגימה תשקע לתוך החור.
· לפני הדגימה, יש לוודא שהנקודה האנכית של חור הדגימה מפוליפרופילן אציל ג'ל נשטף היטב. יש לשטוף את האקרילאמיד הלא פולימריז ואת המים שעשויים להופיע בתחתית חור הדגימה. המים עלולים להקטין את חור הדגימה באופן משמעותי. יש להשתמש במזרק של 25 מ"ל או 50 מ"ל ומחט 18-gaug. יש למזוג את בופר האלקטרופורזה ולשטוף בזהירות את חור הדגימה.
· קשה לראות את חור הדגימה, אך יחד עם זאת, השאר קל. אם ישנם חורים עודפים, ניתן לבדוק את בופר הדגימה באמצעות ברומופנול כחול.